多聚甲醛固定流式检测细胞（多聚甲醛固定细胞需要避光吗）

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本文目录一览：

• 1、多聚甲醛可以直接跑流式吗
• 2、做流式细胞仪之前,如何固定细胞?
• 3、多聚甲醛固定后组织膨胀的原因
• 4、作流式细胞用1%甲醛固定可维持多久
• 5、用于流式检测细胞固定的4%多聚甲醛用0.01的pbs配制吗
• 6、用流式细胞仪检测免疫指标的血液样本怎么保存

多聚甲醛可以直接跑流式吗

可以，用百分之一的多聚甲醛固定十分钟左右就可以了。

如果检测的是前述表格中 不会受多聚甲醛影响的分子 ，可用 1％多聚甲醛 预固定保存，但FSC、SSC和荧光强度影响较大，如需避免此类缺点，可考虑流式中文网研发的 细胞保存液 （）。

的乙醇固定，还是做蛋白染色的多聚甲醛固定，固定液加1mL就可以了，一般每个样品的细胞数都在106左右。固定液太少了不好，因为固定液的实际作用浓 度一定程度上受弃上清后管内残留液体量的影响，但太多了也没有意义。

测Treg最好用商品化的破膜剂，因为Foxp3不太好测；有文献说过这个破膜剂的配方，我记得里面至少含皂角素，而不是单纯的triton。

（6）注意在冷环境下操作染色，或加入叠氮钠，保证细胞免疫荧光定量分析精确和稳定。（7）标本保存，免疫荧光染色后，标本不固定可以在4摄氏度避光情况下保存24小时。

做流式细胞仪之前,如何固定细胞?

1、细胞固定：800rpm离心5min，收集细胞沉淀，弃上清，用预冷PBS洗涤两次，加入预冷75%乙醇，于4摄氏度固定4h以上。

2、流式细胞仪检测细胞内的蛋白首先需要把细胞固定，然后细胞膜通透处理，再染色。不少公司，比如BD都有成套的试剂供应，固定，通透一次性完成。然后就是使用非特异性的同种动物血清（和抗体一个物种，比如小鼠血清）来封闭。

3、培养一段时间后（一般小于一个细胞周期），固定细胞。根据所使用模拟核苷酸的不同，使用不同的方法。EdU，改变缓冲液的pH值，就会发出荧光。而BrdU则需用荧光抗体识别，需要对细胞膜和核膜进行通透处理。再加入PI对DNA染色。

4、细胞分选：根据需要，可以将不同类型的细胞进行分选，常用的分选方式有电荷静电分选、压缩空气分选、磁珠分选等。分选后的细胞可以用于进一步的实验或应用。

5、利用PI标记的方法，通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。 实验步骤： 取对数生长期细胞，倒去培养液，胰酶适度消化细胞，用培养液吹打，800 rpm，离心15 min去上清。

多聚甲醛固定后组织膨胀的原因

多聚甲醛之所以能够起到很好的固定效果，和它的制作工艺、物理性质和化学性质是分不开的。

固定过度：多聚甲醛是一种有效的细胞固定剂，但过度固定可能会导致组织结构变形或收缩。这可能会影响对组织结构和功能的观察和研究结果。 抗原失活：在多聚甲醛中泡久了可能会影响某些抗原的免疫反应性。

染色后的固定，就与抗原构象关系不大了，更多的是荧光素。以前4色以内的时候，用的荧光素都是非串联的，因此大多数影响不大，但随着各种新型串联染料的出现，多聚甲醛固定就成了问题了。

作流式细胞用1%甲醛固定可维持多久

1、细胞表面的抗原，一般是4%的多聚甲醛在抗体染色完成后固定15分钟。如果是染胞内抗原，则是固定通透完成后再染色。

2、在含有一定浓度的甲醛，叠氮钠和葡萄糖的荧光抗体保存液中，可以4℃闭光保存一周甚至更长。当然，固定后细胞体积变小，死细胞增多，并有可能发生荧光粹灭。

3、可以。根据查询分析行业新闻官网显示，血液样本必须在6个小时内处理，晚不得超过12小时；做完染色后，需要放在多聚甲醛中保存，可以存放3天。

4、-48小时。多聚甲醛固定的目的是用于保存细胞和组织的原有形态结构，多聚甲醛这些固定液的固定时间为24-48小时，超过48小时固定液中的醛类物质会与蛋白形成共价结合，从而导致无法保存细胞和组织的原有形态结构。

5、只要密封，甲醛不要太多的挥发掉就没有问题，因为只是短期防腐固定。甲醛含量为35%至40%(一般是37%)的水溶液，也加入10%~15%的甲醇防止聚合。

用于流式检测细胞固定的4%多聚甲醛用0.01的pbs配制吗

1、%多聚甲醛是常用固定液，4%指的是最终的质量体积比，因此，应该是定容至1 L。

2、固定：加入4%多聚甲醛(PBS配制)固定20分钟。如暂时不能立即做组化检测，使用含0.4%多聚甲醛的PBSPH4浸泡细胞（免疫组化检测完成前不要让细胞变干，否则细胞收缩形态不好）。

3、也正是这个原因，实际上多聚甲醛的浓度用4%的多一些，而且因其有挥发性，时间长浓度 会有所降低。至于固定时间，一般4度30min固定作用就已经比较完全了，但是也可以放置过夜，这样有时有利于时间安排。

4、因为甲醛溶液本身含量为39%，一般用水稀释配成10%的溶液用作组织固定用。习惯上叫10%甲醛溶液，实际上含甲醛量是4%。是用PBS溶解固体多聚甲醛配成。

用流式细胞仪检测免疫指标的血液样本怎么保存

1、用于流式检测的全血需要用EDTA抗凝（抽血时使用BD的紫色盖抽血管），抽血后不要冷藏或者冷冻。室温下保存24小时内完成检测。如果血样超过72小时，就不能再用于流式检测了。

2、流式标本最好在采取后2小时内尽快检测。要不就加保护液超低温冻存，要用的时候再复苏，但是比每天做流式更麻烦。

3、流式细胞仪软件市面上绝大多数的流式细胞仪都是以FCS文件格式保存数据的。

4、脐带血保存的血库也分为公共脐带血库和自体脐带血库两种。胎盘结扎时抽取脐带，不会接触胎儿的血液，也不会抽取产妇的血液，对母婴无害。

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